רצף DNA: הגדרה, שיטות, דוגמאות

תוֹכֶן

• גנומיקה ורצף DNA
• הגדרה של רצף DNA
• רצף DNA: מחקר מוקדם
• השאיפה הגדולה ביותר של סנגר הייתה רצף של גנום שלם בקנה מידה גדול, אך רצף של זוגות הבסיס של חיידק חיידק זעיר הוחלף בהשוואה לרצף של 3 מיליארד זוגות הבסיס של הגנום האנושי. עם זאת, לימוד כיצד לרצף את הגנום כולו של חיידק חיידק זעיר היה צעד חשוב בדרך לחבר את כל הגנום של בני האדם. מכיוון ש- DNA וכרומוזומים מורכבים ממיליוני זוגות בסיסים, רוב שיטות הרצף מפרידות בין DNA לרצועות קטנות, ואז קטעי ה- DNA מחוברים זה לזה; זה פשוט לוקח זמן או מכונות מתוחכמות ומהירות.
• יסודות רצף DNA
• שיטות רצף DNA: שיטות סנגר
• התפתחות מרגשת נוספת הייתה שיטת הרובה שנדגמה ברצף אקראי עד 700 זוגות בסיס בפעם אחת. סנגר ידוע גם בזכות השימוש שלו בשיטת הדידיוקסי (דידויקסינוקליאוטיד) שמכניסה נוקליאוטידי לסיום שרשרת במהלך סינתזת ה- DNA לסימון קטעים של DNA לניתוח. הדידיוקסינוקליאוטידים משבשים את פעילות פולימראזת ה- DNA ומונעים את נוקלאוטידים לבנות על מחרוזת DNA.
• שלבי רצף DNA
• התקדמות בטכנולוגיית רצף DNA
• פרויקט הגנום האנושי
• דוגמאות לרצף DNA אחר
• השלכות אתיות של רצף DNA

נוקלאוטידים הם אבני הבניין הכימיות של החיים ונמצאים ב- DNA של אורגניזמים חיים. כל נוקלאוטיד מורכב מ- סוכר, פוספט ו בסיס המכיל חנקן: אדנין (A), תימין (T), ציטוזין (C) וגואנין (G). הסדר הספציפי של בסיסי נוקלאוטידים אלה קובע אילו חלבונים, אנזימים ומולקולות יסומנו על ידי התא.

קביעת הסדר, או רצף הנוקלאוטידים, חשובה לחקר המוטציות, האבולוציה, התקדמות המחלה, בדיקה גנטית, חקירה משפטית ורפואה.

גנומיקה ורצף DNA

גנומיקה הוא המחקר של DNA, גנים, אינטראקציות גנים והשפעות סביבתיות על גנים. הסוד לפתיחת פעולתם הפנימית המורכבת של הגנים הוא היכולת לזהות את המבנה והמיקום שלהם בכרומוזומים.

הכחול של אורגניזמים חיים נקבע לפי סדר (או רצף) של זוגות בסיס חומצות גרעין ב- DNA. כאשר DNA משכפל, זוג אדרנין עם תימין, וציטוזין עם גואנין; זוגות לא תואמים נחשבים מוטציות.

מאז שנוצרה המשגה של מולקולת ה- DNA של ה- Helox deoxyribonucleic (DNA) כפול בשנת 1953, בוצעו שיפורים דרמטיים בתחום הגנומיקה ורצף ה- DNA בקנה מידה גדול. מדענים פועלים במרץ ליישום ידע חדש זה לטיפול אינדיבידואלי במחלות.

יחד עם זאת, דיונים מתמשכים מאפשרים לחוקרים להקדים את ההשלכות האתיות של טכנולוגיות כה מתפוצצות.

הגדרה של רצף DNA

רצף DNA הוא תהליך גילוי הרצף של בסיסי נוקליאוטיד שונים בקטעי ה- DNA. רצף של גנים מלאים מאפשר השוואה בין כרומוזומים וגנומים הנמצאים באותו המין והשונה.

מיפוי כרומוזומים מועיל למחקר מדעי. ניתוח המנגנונים והמבנה של גנים, אללים ומוטציות כרומוזומליות במולקולות DNA מציעים דרכים חדשות לטיפול בהפרעות גנטיות ולעצור גידול סרטני סרטני, למשל.

רצף DNA: מחקר מוקדם

שיטות רצף ה- DNA של פרדריק סנגר קידם מאוד את תחום הגנומיקה החל משנות השבעים. סנגר הרגיש מוכן להתמודד עם רצף DNA לאחר שרצף רצף RNA בהצלחה בלימוד אינסולין. סנגר לא היה המדען הראשון שהתמודד עם רצף ה- DNA. עם זאת, שיטות רצף ה- DNA החכמות שלו - שפותחו במקביל לעמיתים ברג וגילברט - זכו בפרס נובל בשנת 1980.

השאיפה הגדולה ביותר של סנגר הייתה רצף של גנום שלם בקנה מידה גדול, אך רצף של זוגות הבסיס של חיידק חיידק זעיר הוחלף בהשוואה לרצף של 3 מיליארד זוגות הבסיס של הגנום האנושי. עם זאת, לימוד כיצד לרצף את הגנום כולו של חיידק חיידק זעיר היה צעד חשוב בדרך לחבר את כל הגנום של בני האדם. מכיוון ש- DNA וכרומוזומים מורכבים ממיליוני זוגות בסיסים, רוב שיטות הרצף מפרידות בין DNA לרצועות קטנות, ואז קטעי ה- DNA מחוברים זה לזה; זה פשוט לוקח זמן או מכונות מתוחכמות ומהירות.

יסודות רצף DNA

סנגר ידע את הערך הפוטנציאלי של עבודתו ולעתים קרובות שיתף פעולה עם מדענים אחרים ששיתפו את תחומי העניין שלו ב- DNA, ביולוגיה מולקולרית ומדעי החיים.

למרות איטיות ויקרות בהשוואה לטכנולוגיות הרצף של ימינו, שיטות רצף ה- DNA של סנגר זכו לשבחים באותה תקופה. לאחר ניסוי וטעייה, מצא סנגר את "המתכון" הסודי הביוכימי להפרדת גדילי DNA, ליצירת DNA רב יותר וזיהוי סדר הנוקליאוטידים בגנום.

ניתן לרכוש בקלות חומרים באיכות גבוהה לשימוש במחקרי מעבדה:

שיטות רצף DNA: שיטות סנגר

סנגר הבין כיצד לחתוך DNA לקטעים קטנים בעזרת האנזים DNA פולימראז.

לאחר מכן הוא הכין יותר DNA מתבנית והכניס עוקבים רדיואקטיביים ל- DNA החדש כדי לתחום חלקים מהגדלים המופרדים. הוא גם הכיר בכך שהאנזים זקוק לפריימר שיכול להיקשר למקום מסוים בגדיל התבנית. בשנת 1981, סנגר עשה שוב היסטוריה בכך שהוא גילה את הגנום של 16,000 זוגות הבסיס של ה- DNA המיטוכונדריאלי.

התפתחות מרגשת נוספת הייתה שיטת הרובה שנדגמה ברצף אקראי עד 700 זוגות בסיס בפעם אחת. סנגר ידוע גם בזכות השימוש שלו בשיטת הדידיוקסי (דידויקסינוקליאוטיד) שמכניסה נוקליאוטידי לסיום שרשרת במהלך סינתזת ה- DNA לסימון קטעים של DNA לניתוח. הדידיוקסינוקליאוטידים משבשים את פעילות פולימראזת ה- DNA ומונעים את נוקלאוטידים לבנות על מחרוזת DNA.

שלבי רצף DNA

יש להתאים את הטמפרטורה בזהירות לאורך כל תהליך הרצף. ראשית, חומרים כימיים מוסיפים לצינור ומחוממים כדי לפתור (לדלף) את מולקולת ה- DNA הכפולת. ואז מקוררים את הטמפרטורה, ומאפשרים לפריימר להתקשר.

בשלב הבא, הטמפרטורה מוגברת כדי לעודד פעילות אופטימלית של פולימראז DNA (אנזים).

פולימראז משתמש בדרך כלל בגרעינים הנורמליים הקיימים, שמתווספים בריכוז גבוה יותר.כאשר הפולימראז מגיע לנוקליאוטיד שקשור לצבע "מסיים שרשרת", הפולימראז נעצר והשרשרת מסתיימת שם, מה שמסביר מדוע נוקליאוטידים צבועים נקראים "סיום שרשרת" או "מסיים".

התהליך נמשך פעמים רבות. בסופו של דבר, הנוקלאוטיד המקושר לצביעה הוצב בכל עמדה ברצף ה- DNA. אלקטרופורזה ג'ל ותוכנות מחשב יכולות לאחר מכן לזהות את צבעי הצבע על כל אחד מגדילי ה- DNA ולבדוק את כל רצף ה- DNA על בסיס הצבע, מיקום הצבע ואורך הגדילים.

התקדמות בטכנולוגיית רצף DNA

רצף תפוקה גבוהה - מכונה בדרך כלל רצף הדור הבא - משתמש בפיתוחים וטכנולוגיות חדשים כדי לרצף בסיסי נוקליאוטידים במהירות ובזול מתמיד. מכונת רצף DNA יכולה להתמודד בקלות עם מתיחות DNA רחבות היקף. למעשה, הגנום כולו יכול להיעשות תוך שעות ספורות, במקום שנים בטכניקות הרצף של סנגר.

שיטות רצף הדור הבא יכולות להתמודד עם ניתוח DNA בנפח גבוה ללא השלב הנוסף של הגברה או שיבוט כדי להשיג מספיק DNA לרצף. מכונות רצף DNA מפעילות תגובות רצף מרובות בו זמנית, וזה זול ומהיר יותר.

בעיקרו של דבר, הטכנולוגיה החדשה של רצף ה- DNA מריצה מאות תגובות של סנגר על גבי שבב קטן וקל לקריאה שמופעל באמצעות תוכנית מחשב המרכיבה את הרצף.

הטכניקה קוראת שברי DNA קצרים יותר, אך היא עדיין מהירה ויעילה יותר משיטות הרצף של סנגר, כך שניתן אפילו לסיים במהירות פרויקטים בקנה מידה גדול.

פרויקט הגנום האנושי

ה פרויקט הגנום האנושישהושלם בשנת 2003, הוא אחד ממחקרי הרצף המפורסמים ביותר שנעשו עד כה. על פי מאמר משנת 2018 ב חדשות המדעהגנום האנושי מורכב מכ- 46,831 גנים, שהיה אתגר אדיר לרצף. מדענים מובילים מרחבי העולם בילו כמעט 10 שנים בשיתוף פעולה וייעוץ. בראשות המחקר הלאומי לגנום אנושי

המכון, המיזם מיפה את הגנום האנושי בהצלחה באמצעות מדגם מורכב שנלקח מתורמי דם אנונימיים.

פרויקט הגנום האנושי הסתמך על שיטות רצף של כרומוזום מלאכותי חיידקי (מבוסס על BAC) כדי למפות זוגות בסיס. הטכניקה השתמשה בחיידקים לשיבוט שברי DNA, והתוצאה הייתה כמויות גדולות של DNA לרצף. לאחר מכן הופחתו השיבוטים בגודלם, הונחו במכונת רצף והורכבו למתיחות המייצגות DNA אנושי.

דוגמאות לרצף DNA אחר

תגליות חדשות בגנומיקה משנות עמוקות גישות למניעה, גילוי וטיפול במחלות. הממשלה התחייבה במיליארדי דולרים למחקר DNA. אכיפת החוק מסתמכת על ניתוח DNA על מנת לפתור תיקים. ניתן לרכוש ערכות לבדיקת DNA לשימוש ביתי לצורך חקר אבותיהם ולזהות גרסאות גנים העלולות להוות סכנות בריאותיות:

השלכות אתיות של רצף DNA

טכנולוגיות חדשות מגיעות לרוב עם אפשרות לתועלת חברתית, כמו גם לפגיעה; דוגמאות לכך כוללות תחנות כוח גרעיניות תקינות וכלי נשק גרעיניים להשמדה המונית. גם לטכנולוגיות ה- DNA יש סיכונים.

חששות רגשיים בכל הקשור לרצף DNA וכלי עריכת גנים כמו CRISPR כוללים חששות שהטכנולוגיה עשויה להקל על שיבוט אנושי, או להוביל לבעלי חיים טרנסגניים מוטנטים שנוצרו על ידי מדען נוכל.

לעתים קרובות יותר, סוגיות אתיות הקשורות ברצף DNA קשורות להסכמה מדעת. גישה נוחה לבדיקת DNA ישירה לצרכן פירושה שלקוחות אינם עשויים להבין לחלוטין כיצד המידע הגנטי שלהם ישמש, מאוחסן ומשותף. אנשים שקרנים עשויים לא להיות מוכנים רגשית ללמוד על גרסאות הגן הפגומות שלהם והסיכונים הבריאותיים שלהם.

צדדים שלישיים כמו מעסיקים וחברות ביטוח עלולים להפלות פוטנציאל להפלת אנשים הנושאים גנים פגומים העלולים לגרום לבעיות רפואיות חמורות.