תוֹכֶן
ברגע שאתה מריץ דגימות DNA על ג'ל אגרוז וצילם תמונה, אתה יכול לשמור את התמונה להמשך הדרך, ואז תוכל לנתח את התוצאות ולפרש אותן. סוגי הדברים שאתה מחפש תלויים באופי הניסוי שלך. אם אתם מבצעים למשל אצבעות DNA, תרצו להשוות את גודל חלקי ה- DNA משתי דגימות - מהחשוד ומדגם מזירת פשע, אולי. אם אתה עובד עם פלסמידים מחיידקים, לעומת זאת, ייתכן שתצטרך לוודא שהפלסמיד מכיל את הכיסוי. כתוצאה מכך, איך שתפרש את הג'ל שלך יהיה תלוי בחלק מהניסוי שעשית. עם זאת, ישנם כמה כללים כללים שאתה יכול להחיל.
החל מראש התמונה, מדדו את המרחק לכל פס בנתיב ה"סטנדרטים "של הג'ל שלך (המכונה גם הסולם). מסלול התקנים מכיל חתיכות DNA שגודלן כבר ידוע, לכן עליכם לדעת כבר את הגודל של כל אחת מהן לפני תחילת הניסוי. מדדו גם את המרחק שנסעו על ידי הלהקות בכל אחד מנתיבי המדגם.
חלקו את המרחק כל תקן וכל רצועה בדגימות הנסיעות לפי המרחק לתחתית הג’ל. התוצאה נקראת הניידות היחסית. אתה יכול להשתמש בתוכנית הגיליונות האלקטרוניים כדי לעשות את החשבון בשבילך אם זה יקל על צעד זה.
הזן את הניידות והגודל היחסי של כל תקן לתוכנית הגיליון האלקטרוני שלך, ואז השתמש בכלי הגרפים של תוכניות הגיליון האלקטרוני שלך כדי ליצור גרף של נתונים אלה עם ניידות יחסית על ציר ה- x והגודל ב- y.
התאם קו לתרשים באמצעות רגרסיה לא לינארית. עיין בקטע העזרה של תוכניות הגיליון האלקטרוני שלך אם אתה צריך לדעת לעשות זאת. אתה אמור להסתיים במשוואה, אולי דומה לדברים הבאים:
y = (0.3) x ^ -2.5
שימו לב ש- x כאן תהיה הניידות היחסית, בעוד y הוא הגודל. שימו לב כי למשוואה שלך עשויים להיות מספרים שונים לחלוטין עבור האקספקטנט והמקדם - משוואה זו ניתנת רק כדוגמה היפותטית.
קח את הניידות היחסית ללהקות מהדגימה שלך וחבר אותה כ- x כדי לחשב את גודל חלקי ה- DNA בלהקות המדגם.
נניח שהמשוואה הנגזרת על ידי תוכנית הגיליון האלקטרוני שלך הייתה אכן y = (0.3) x ^ -2.5, והניידות היחסית של פס מדגם מסוים הייתה 0.68. באמצעות החלפת 0.68 למשוואה שלך, אתה מוצא את הדברים הבאים:
y = (0.3) (0.68) ^ - 2.5
בעזרת המחשבון שלך אתה מעלה 0.68 ל -2.5 ומצא את הדברים הבאים:
y = (0.3) (2.62)
y = 0.786
וזה יהיה הגודל המשוער בקילובאזים של ה- DNA באחת הלהקות מהמדגם שלך.
פלסמידים
שים לב שאולי לא תצטרך להשתמש בהוראות בסעיף זה. לרוב משתמשים באלקטרופורזה של ג'ל Agarose לאישור כי פלסמיד מכיל תוספת נתונה. אם אינך עובד עם פלסמידים, אתה יכול לדלג על פרק זה. עם זאת, אם כן, תוכל לבצע את ההוראות הבאות.
שימו לב שאם אתם עובדים עם פלסמידים לא חתוכים או מכוסים, אינכם יכולים לאמוד את הגודל באמצעות ההליך מסעיף 1 לעיל. זה בגלל שפלסמידים לא חתוכים ומכוסים נודדים בקצב שונה מ- DNA ליניארי.
השווה את מספר הלהקות בכל נתיב. נזכיר כי אנזים להגבלה חותך DNA באתרים בהם מתרחש רצף נתון המכונה אתר ההגבלה. אם טופלו במדגם עם שני אנזימי הגבלה, על שניהם להיות נוכחים להוספה ולהקה לשארית הפלסמיד. זה בגלל שהכניסה תהיה מסודרת על ידי שני אתרי הגבלה, כל אחד עבור אנזים שונה, כך שחתכים בשני האתרים הללו ישחררו את הכיסוי מהפלסמיד. לעומת זאת, חתך באתר אחד בלבד יהפוך את הפלסמיד ל- DNA ליניארי. אם כן, דגימת חתך ללא אנזימי הגבלה או אנזים הגבלה אחד אמור להכיל רצועה יחידה ואילו דגימת חתך עם שני אנזימי הגבלה אמורה לכלול שתי להקות.
שימו לב ללהקות שנוצרו על ידי DNA פלזמיד מסומן. לפלסמיד מסומן יש חתך בגדיל יחיד בלבד, ולכן הוא נודד לאט יותר מאשר פלסמיד חתוך. פלסמידים חתוכים בתורם נודדים לאט יותר מאשר DNA לא חתוך.
הערך את גודל התוספת באמצעות הנוהל המתואר בסעיף 1 וקבע אם זה תואם את הציפיות שלך (שישתנו בהתאם לניסוי.)