תוֹכֶן
כאשר עובדים עם כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), כיול טוב הוא חיוני ביותר בכדי להבטיח תוצאות אמינות ואיכותיות. כיול נכון של מכשיר HPLC מתחיל ביצירת תקן כיול מתאים. ברוב המקרים, כיול למעשה דורש סדרה של סטנדרטים של הגדלת הריכוז כדי לייצר מה שמכונה עקומת כיול. זהו קו מזווה ומשוואה נלווית המתארת את הקשר בין ריכוז הכימיקל הנבדק לתגובה של גלאי HPLC.
קבע את הכימיקלים שברצונך לבדוק לשימוש ב- HPLC ("האנליט"). לדוגמה, ייתכן שתרצה לבדוק סדרה של משקאות קלים עם תכולת פרוקטוזה, ובמקרה זה פרוקטוז יהיה האנליט.
השג כמות של חומר הכימיה האנליטי בטוהר מתאים. בדרך כלל הטוהר צריך להיות מעל 99% ויש לרכוש את האנליטי מחברת אספקה כימית מכובדת. במקרה של פרוקטוז, למשל, היית רוכש פרוקטוז טהור מספק כימי ולא מחנות מכולת.
קבע את הריכוזים המקסימליים והמינימום הצפוי של האנליט בדגימות שאתה מתכוון לבדוק ב- HPLC. במקרה של משקאות קלים, הייתם בודקים את תוויות המשקאות וקובעים את תכולת הפרוקטוז הנמוכה והגבוהה ביותר מבין המשקאות שתבדקו. זכור כי הדגימה הראשונית (המשקה הקל) עשויה להיות מדוללת או מניפולציה אחרת בדרך זו במהלך ההכנה לניתוח (תלוי בשיטת HPLC המשמשת) וכך ניתן לשנות את ריכוז האנליט בדגימות המוזרקות על גבי HPLC. יש לקחת בחשבון את ריכוז האנליט בדגימות המופעלות ב- HPLC.
קבע את הממס שבו תמיס את האנליט שלך כדי להמציא תקני כיול. ממס זה חייב להיות מסוגל להמיס כראוי את האנליט על פני טווח ריכוז רחב יחסית (גבוה לפחות כמו בדגימות שאתה מתכוון לבדוק). כמו כן, באופן אידיאלי, ממס זה צריך להיות דומה למדי ל"שלב הנייד: "הממס המשמש להובלת דגימות באמצעות מכשיר HPLC.
חשב את כמות האנליט הנדרש להכנת פיתרון "סטנדרטי במלאי" של האנליט. זה נמצא על ידי הכפלת הריכוז הנדרש של תקן המלאי בנפח הרצוי. ריכוז האנליט בתמיסה זו צריך להיות לפחות 10% יותר מריכוז המדגם הצפוי הגבוה ביותר. אם ריכוז הפרוקטוז הצפוי הגבוה ביותר במדגם של משקה קל הוא 8 גרם / 100 מיליליטר, ניתן היה לקבוע את סטנדרט המניה לריכוז של 10 גרם פרוקטוז / 100 מיליליטר. נפח סביר הוא 500 מיליליטר, ולכן נדרש 8/100 מ"ל x 500 מ"ל = 40 גרם פרוקטוז.
שקלו את כמות האנליט הנדרשת לרמת דיוק מתאימה. לעתים קרובות ערך משקל בגרמים המדויק למקומות עשרוניים או שניים עשרוניים מתאים, אך דיוק נוסף עשוי להיות נחוץ לשיטות מסוימות.
העבירו את האנליט השוקל לבקבוק נפח הנפח הדרוש והוסיפו את הממס הרצוי לסימן המילוי שעל הבקבוק. שימוש בבקבוק נפח (ולא בבכוס מדורגים, למשל) מגביר את הדיוק של ערך הריכוז הסטנדרטי במלאי. ודא כי כל האנליט מועבר לבקבוק; השתמש בכמה מהממס כדי לשטוף אותו במידת הצורך.
עצרו את הבקבוק הנפשי ונערו בעדינות או הפוכים עד להמסה האנליטית לחלוטין.
ערוך סדרה של דילולים משתנים של תקן המניה על ידי העברת נפחים ידועים של תקן המניה לבקבוקים נפחיים, בעזרת פיפטות להעברה מדויקת, ואז הוספת ממס. הריכוז הסטנדרטי הנמוך ביותר צריך להיות מתחת לדגימה הנמוכה ביותר שצפויה לנתח. בדוגמא המשקאות הקלים, אם ריכוז הפרוקטוז הצפוי הנמוך ביותר במדגם הוא 2 גרם / 100 מ"ל, ניתן היה ליצור סטנדרט 1 גרם / 100 מ"ל. זה ייעשה על ידי דילול פי עשרה של תקן המניה. הסדרה הסטנדרטית צריכה לכלול בסך הכל 5 או 6 ריכוזים, כך שיידרשו דילולים נוספים לייצור סטנדרטים של אולי 3, 5 ו 8 גרם פרוקטוז / מ"ל. יש לך עכשיו סדרה של פתרונות סטנדרטיים איתם ניתן לכייל את ה- HPLC.