תוֹכֶן
באלקטרופורזה של ג'ל מופרדים דגימות של DNA או חלבונים - בדרך כלל על פי גודל - על ידי יישום שדה חשמלי הגורם להם לנדוד דרך ג'ל. השימוש באלקטרופורזה בג'ל הוא שגרתי במעבדות מחקר ביו-רפואיות ומשמש לענות על מגוון שאלות שונות, כך שאין באמת דרך אוניברסלית לנתח את התוצאות.
טכניקות שונות כמו כתמים מערביים, כתמים בצפון וכתמים דרומיים למשל כוללות אלקטרופורזה של ג'ל.
אם אתם מבצעים אלקטרופורזה ג'ל של agarose של דגימות DNA, הסוג הנפוץ ביותר של הליך, עליכם בדרך כלל לעשות לפחות שני דברים: 1) להבדיל בין פלסמידים לא חתוכים לתוספות, פלסמידים מסורקים ופלסמידים חתוכים, 2) להעריך את גודלם של השונים השונים שברי DNA עם עקום רגיל של Excel או מחשבון.
ככה זה עובד.
בדוק את מחברת המעבדה שלך כדי לקבוע אילו דוגמאות הועמסו לאילו נתיבים. כאשר העמסת את הבארות לג'ל שלך, היית צריך לציין את זהות כל מסלול / מדגם.
קבע איזה מסלול מכיל את "הסולם" של תקני ה- DNA. אלה שברים באורך ידוע; ניתן להשתמש במרחק הנדידה שלהם כדי לקבוע את גודל שברי הדגימה באמצעות Excel עקומה רגילה או מחשבון אחר.
השתמש בסרגל, למדוד את המרחק בתמונה שלך מהבארות לצבע העקיבה, אשר יימשך רחוק יותר מכל אחת מלהקות ה- DNA (במילים אחרות, זה יהיה בתחתית הג'ל). רשמו את המספר הזה - היחידות בהן אתם משתמשים אינן חשובות.
מדוד את המרחק בתמונה שלך מהבארות לכל אחת מהלהקות ב"סולם ", ואז חלק את המרחק הזה לפי המרחק שעבר להקת הצבע המעקב. חישוב זה נותן לך את הניידות היחסית של כל להקה.
דוגמה: נניח שהלהקה של צבע המעקב נסעה 6 אינץ 'ויש לנו שלוש להקות שנסעו 5, 4.5 ו- 3.5 אינץ'.
מה הניידות היחסית שלהם? תשובה: אנו מחלקים 5, 4.5 ו- 3.5 על 6 כדי להשיג ניידות יחסית של 0.833, 0.75 ו- 0.5833.
הזן את הניידות היחסיות לתוכנית הגיליון האלקטרוני שלך (Excel או כל תוכנית דומה אחרת שאתה משתמש בה) יחד עם הגודל בקילובאזים של כל שבר בסולם.
היצרן נותן לך את הגודל של כל שבר בסולמות שהם מספקים, כך שכדאי שיהיה לך מידע זה.
תרשים את הנתונים עם ניידות יחסית על ה- x וגודל קילובייס ב- y.
השתמש בפונקציית Trendline בתוכנית הגיליון האלקטרוני שלך בכדי להתאים משוואה לנתונים. משוואה זו צריכה להיות משוואת כוח (למשל x ^ -2) והיא צריכה להתאים לנתונים בצורה טובה יחסית (מקדם R של 0.9 לפחות). זה יוצר עקומה ועקומה רגילה של Excel.
התבונן בלהקות המתאימות לדגימות שלך.
זכור כי שברי DNA קטנים יותר נעים דרך הג'ל מאשר שברי DNA גדולים, כך שאלו הקרובים ביותר לצבע המעקב יהיו הקטנים ביותר. עם זאת, שימו לב שאם DNA פלסמיד (מעגלי) אינו חתוך, הוא יהפוך ל"סולל-על "או מעוות כמו חוט טלפון, מה שבעצם יגרום לו לנסוע רחוק יותר מאשר DNA ליניארי באותו גודל.
כמו כן, פלסמיד "מכוסה" שנחתך בצורה לא מלאה ייסע א קצר יותר מרחק מאשר DNA ליניארי באותו גודל. כתוצאה מכך אינך יכול להעריך את גודל הפלסמידים הלא חתוכים מהג'ל שלך.
התאם את הלהקות בכל מסלול זהות עם הדגימה שהטענת באותו מסלול וקבע אם מה שאתה רואה זה מה שהיית מצפה. זה יהיה תלוי באופי הניסוי שלך.
באופן כללי, עם זאת, אם עכלת תוסף פלסמיד עם שני אנזימי הגבלה, היית מצפה שהתוספת תשוחרר מהפלסמיד.
מכיוון שהוא קטן בהרבה מהפלסמיד, הייתם מצפים לראות שתי רצועות בנתיב ההוא, האחת ליד החלק העליון והשנייה בסמוך לתחתית. חתך פלסמיד עם אנזים מוגבל אחד בלבד צריך ליצור רק רצועה יחידה שהולכת מעט יותר רחוקה מהפלסמיד שנחתך עם שני אנזימי הגבלה, אך בשום מקום לא קרוב לתוספת.
מדדו את המרחק מהבארות לפלסמיד החתוך והכניסו רצועות עם הסרגל שלכם. חלקו את המספרים הללו לפי המרחק שעבר צבע המעקב כדי למצוא ניידות יחסית של תוספות ופלסמידים חתוכים.
חבר את הניידות היחסית של תוספות ופלסמידים חתוכים למשוואה שתוכנית הגיליון האלקטרוני שלך חישבה עבורך. חישוב זה אמור לתת לך הערכה לגודל פלסמידים אלה.