מהם חוצצים ביולוגיים?

תוֹכֶן

• איך פועלים עובדים
• דרישות למאגר
• בחירת מאגר מתאים
• כיצד לשנות את רמת החומציות של מאגר
• דוגמאות למאפים ביולוגיים

בתאים ובאורגניזמים חיים הנוזלים המקיפים את התאים ובתוך אותם נשמרים על pH קבוע. לעתים קרובות ה- pH במערכת זו חיוני לתגובות הביוכימיות המתרחשות בתוך האורגניזם. כדי ללמוד תהליכים ביולוגיים במעבדה, מדענים משתמשים במאגר כדי לשמור על רמת החומציות הנכונה במהלך הניסוי. מאגרים ביולוגיים רבים תוארו במקור על ידי גוד ועמיתיהם בשנת 1966 והם עדיין משמשים במעבדות כיום.

איך פועלים עובדים

חוצץ הוא פשוט פיתרון המכיל חומצה חלשה ובסיס מצומד שלה. כאשר מוסיפים חומצה למאגר, היא מגיבה עם הבסיס המצומד מה שהופך חומצה חלשה וכמעט לא משפיע על pH של התמיסה.

דרישות למאגר

מספר מאפיינים הופכים את המאגר הביולוגי ליעיל. הם צריכים להיות מסיסים במים, אך לא מסיסים או מסיסים באופן מינימלי בממסים אורגניים. החוצץ לא אמור להיות מסוגל לעבור דרך קרום התא, מכיוון שזה יכול להשפיע על התנהגות התא. חוצצים צריכים להיות לא רעילים, לא צריכים לספוג קרינת UV וצריכים להישאר אינרטיים ויציבים לאורך כל התהליך הניסוי. טמפרטורה והרכב יוני לא אמורים לשנות את רמת החומציות או את יכולת המאגר.

בחירת מאגר מתאים

למאגר שנבחר צריך להיות pKa בטווח האופטימלי לתהליך הנחקר. חוצץ עם pKa גבוה יותר מתאים אם ככל הנראה תהיה עלייה ב pH במהלך הניסוי, ולהיפך אם ה- pH צפוי לרדת. יש לייעל את ריכוזי המאגר, מכיוון שריכוזים הגבוהים מ- 25mM עשויים להיות בעלי יכולת חיץ טובה יותר אך עשויים לעכב פעילויות סלולריות כמו אנזימים. השיטה מכתיבה גם באיזה מאגר להשתמש; לדוגמא, באלקטרופורזה, חיץ בעל חוזק יוני נמוך מתאים למניעת התחממות של מטריצת הג'ל.

כיצד לשנות את רמת החומציות של מאגר

מכיוון שה- pH יכול להשתנות עם שינויי טמפרטורה, על מדענים לבדוק את רמת ה- pH של המאגרים בטמפרטורה בה הם יבצעו את הניסוי. טריס הוא חיץ הרגיש במיוחד לשינויים ב- pH עם הטמפרטורה. יש לכייל את כל מדי החומציות בטמפרטורת העבודה. תוספים יכולים גם לשנות את רמת החומציות, ולהפוך את הבדיקה מחדש לצורך. כדי לשנות את החומציות מוסיפה חומצה, בדרך כלל חומצה הידרוכלורית, או בסיס, בדרך כלל נתרן או אשלגן הידרוקסיד; יש לעשות זאת לאט כדי למנוע הפעלה או שינויים כימיים במאגר.

דוגמאות למאפים ביולוגיים

חיץ TE, שהוא 10 mM Tris · HCl ו- 1 mM EDTA, מתאים במספר ערכי pH לאחסון חומצות גרעין. אלקטרופורזה היא שיטה נפוצה לחקר חלבונים או חומצות גרעין; בתהליך זה משתמשים במספר מאגרים, כולל Tris-acetate-EDTA, Tris-glycine ו- Tris-borate-EDTA. מאגרים אלה מונעים את חימום מטריצת הג'ל ויכולים להכיל תוספים כמו אוריאה ו- SDS, בהתאם לחקירה.