כיצד לחשב ריכוז תאים

מדענים וטכנאים צריכים לרוב לחשב את ריכוז התאים במתלה. לדוגמה, כאשר חולה נשאב את דמו במשרד רופא, המעבדה יכולה להשתמש בשיטות מסוימות כדי לחפש את כמות תאי הדם הלבנים בנפח דם מסוים. זה נותן לרופא מידע רב על הבריאות לגבי המטופלת שלה, במיוחד מערכת החיסון שלו והאם הוא נלחם בזיהום או מחלה אחרת. בדיקות כמו אלה יכולות לחפש תאים רבים אחרים בדם כמו גם נוזלי עמוד שדרה ונוזלים גופניים אחרים, כמו ספירת תאי זרע בזרע למטרות פוריות. מדענים מחשבים גם ריכוזי תאים של חיידקים, שמרים ומיקרואורגניזמים אחרים למטרות רבות החל ממחקר אקולוגי לטכנולוגיות תעשייתיות. אחת הטכניקות הנפוצות נלמדת גם בכיתות ביולוגיה רבות במכללה, והיא משתמשת במכשיר שנקרא תא ספירה.

לפני שתליית התא יכולה להיכנס לתא הספירה, היא עשויה להזדקק לדילול מכיוון שהיא עשויה להכיל אלפי או מיליוני תאים. במקרה זה, לא ניתן לספור את התאים באופן סביר. כדי לדלל את הדגימה, השתמש בפיפטה סטרילית בכדי למקם עשרה מיקרוליט של תמיסת התא בצינור הבדיקה המכיל 90 מיקרוליטר מדולל. סוג הדילול תלוי בסוג התא. מערבבים אותו היטב. פיתרון זה מדולל פי עשרה מהמדגם הראשוני, ולכן גורם הדילול שלו הוא 10^-1. תייג את זה. חזור על הפעולה מספר פעמים, בעזרת פיפטה סטרילית בכל פעם, עד שהתמיסה דיהה. אם דיללת אותו פעם שנייה, מבחנת השנייה הייתה מדוללת פי מאה מהפתרון הראשוני, כך שגורם הדילול היה 10^-2 וכן הלאה.

יתכן שתצטרך לנסות מספר דילולים כדי לקבוע את גורם הדילול המתאים לתא הספירה. תא ספירה הוא בעצם קופסה קטנה מאוד, ברורה ומלבנית, עם עומק מדויק ורשת מדויקת המוטבעת על החלק העליון. זה ידוע גם בשם hemocytometer, או לפעמים hemacytometer. המטרה היא שהמתלים יהיו מדוללים מספיק, שכאשר הם צופים בתא הספירה, אף תאים לא חופפים, והם מופצים ברחבי הרשת בצורה אחידה. פיפט את ההשעיה המדוללת המכילה את התאים לבאר בתא הספירה, שם היא תתיישב בתא הרשת באמצעות פעולה נימית. הנח את תא הספירה על במת המיקרוסקופ וצפה בו תחת עוצמה נמוכה.

הרשת מכילה ריבועים העשויים מכיכרות קטנות עוד יותר. בחר בערך ארבע או חמישה ריבועים, או רבים ככל שיהיו עליך לספור לפחות 100 תאים, בתבנית שתבחר, כגון ארבע הפינות וריבוע מרכזי. אם התאים גדולים, אלה יכולים להיות הריבועים הגדולים, אך אם התאים קטנים, תוכלו לבחור בריבועים הקטנים יותר במקום זאת.

הנפח הספציפי של כל ריבוע רשת עשוי להשתנות על ידי ספירת יצרן החדרים, אך לעיתים קרובות, עומק התא הוא 0.1 מילימטרים, שטח הריבועים הגדולים הוא מילימטר רבוע, ושטח הריבועים הקטנים יותר הוא 0.04 מילימטרים. אם כן, בריבועים הגדולים יש נפח של 0.1 מילימטרים. לדוגמא זו, נניח שספרתם בסך הכל 103 תאים בחמישה ריבועים, ושדיללתם את הדגימה הראשונית עד שגורם הדילול היה 10^-2.

אם לכל ריבוע רשת יש נפח של 0.1 קוביק וחמישה נספרו, אז נפח החדר הכולל נספר היה 0.5 קוביק, והיו 103 תאים. הכפילה את גודלו עד שמילימטר מעוקב יהפוך אותו ל 206 תאים. סנטימטר מעוקב אחד שווה למיליליטר, המהווה מדידה שימושית לנוזלים. ישנם 1,000 מילימטרים בסנטימטר מעוקב. לכן, אם היה תלוי סנטימטר מעוקב, או מיליליטר, של השעיה, היית סופרת 206,000 תאים (206 על 1,000). כך זה נראה כשוואה:

נפח רשת ריבוע × מספר ריבועים נספר = נפח כולל של ההשעיה

מספר התאים ÷ נפח ההשעיה נספר = ספירת תאים למילימטר קוביות

ספירת תאים למילימטר קוביות × 1000 = ספירת תאים למיליליטר

יהיה עליך לתת דין וחשבון על כל דילול שבוצע בכדי להפוך את הפיתרון הראשוני לספור תחת המיקרוסקופ. בדוגמה זו, גורם הדילול הוא 10^-2. כדי לחשב את הריכוז הראשוני של הפתרון:

ספירת תאים למיליליטר ÷ גורם דילול = ריכוז התא

לדוגמה זו, ספירת התאים למיליליטר היא 206,000, ומחלקת את זה בעשרה^-2 (0.01) נותן ריכוז תאים של 20,600,000 תאים למיליליטר במדגם הראשוני.