תוֹכֶן
כמת את מדגם ה- RNA שלך על ידי מדידת ספיגתו לאור אולטרה סגול (UV). ספקטרופוטומטר טיפה ננו ישתמש רק במיקרוליטר אחד או שניים מהמדגם שלך, שתוכל לשחזר. ספקטרופוטומטרים אחרים דורשים מדגם גדול בהרבה. מקדם ההכחדה של נוקלאוטידים באורך גל UV של 260 ננומטר בנתיב אור של 1 ס"מ הוא 20. בהתבסס על מקדם הכחדה זה, הקליטה של RNA 40 מיקרוגרם / מ"ל באותם תנאים היא אחת. באמצעות מידע זה, אתה יכול לחשב את הריכוז של מדגם ה- RNA שלך.
בצע דילול, במידת הצורך, של המדגם שלך. דילול סטנדרטי למיקרוקוואט הוא 1:40. בצע דילול זה על ידי הוספת 2 μL RNA מדגם למים סטריליים 78 μL.
עקוב אחר הפרוטוקולים של הספקטרופוטומטר הספציפי שלך לכיול המכונה באמצעות ריק ואז קבע את הצפיפות האופטית של הדגימה שלך באורך גל UV של 260 ננומטר.
הכפל את ספיגת הדגימה שלך על ידי גורם הדילול שלך ב- 40 מיקרוגרם RNA / ml. המשוואה תהיה: "ריכוז RNA (מיקרוגרם / מ"ל) = (OD260) x (גורם דילול) x (40 מיקרוגרם RNA / ml) / (יחידת OD260 יחידה)" (Hofstra.edu) לדוגמה: אם דיללת את המדגם שלך על ידי 1:40 וקריאת הספיגה שלך הייתה 0.08, היית מכפיל 0.08 x 40 x 40 = 128 מיקרוגרם / מ"ל = 0.13 מיקרוגרם / מיקרוגרם
גלה את טוהר הדגימה שלך על ידי בדיקת קריאת ספיגה נוספת באורך גל UV 280nm. היחס OD 260 / OD 280 יציין אם - ובאיזו איזו - הדגימה שלך מזוהמת בחלבון או בפנול. תוצאה של 1.8 עד 2.0 מצביעה על RNA איכותי.