טכניקות לניקוי ביוכימיה

Posted on
מְחַבֵּר: Lewis Jackson
תאריך הבריאה: 11 מאי 2021
תאריך עדכון: 1 יולי 2024
Anonim
Protein Purification
וִידֵאוֹ: Protein Purification

תוֹכֶן

ביוכימיה חוקרת מולקולות כמו DNA, RNA וחלבונים. טכניקות הסימולציה הן מה שמדענים משתמשים בכדי להפריד מולקולות מסוג זה. בתאים הם קיימים כתערובת. הקרישה מאפשרת לחוקרים למצוא חלבון אחד בקרב רבים, כמו מחט בערימת שחת. בדרך כלל הקרישה נעשית על ידי מתן תערובת של DNA, RNA או חלבון לזרום דרך לוח ג'ל. ג'ל זה מאפשר למולקולות קטנות לנוע מהר יותר מאשר מולקולות גדולות יותר. לאחר מכן נלחצים על המולקולות המופרדות על קרום העוזר להעביר את המולקולות מהג'ל אל הממברנה. המולקולות נדבקות לקרום, אך נשארות באותו מקום, חוץ זו מזו, כאילו הן עדיין בג'ל.

כתם מערבי

כתמים מערביים היא טכניקה נפוצה להפרדת חלבונים לפי גודל, אך בעמודים ישרות. עמודות מקבילות אלה מאפשרות לחוקרים להשוות את כמות החלבון בין דגימות שונות המופעלות ממש אחת ליד השנייה, כמו מסלולי באולינג. לדוגמה, אם היית בודק את ההשפעה של כמויות שונות של תרופה על צמיחת תאים, היית מתייחס לארבע קבוצות שונות של תאים בכמות שונה של תרופה. אז אתה יכול לשבור את התאים פתוחים ולהפעיל את החלבונים של כל קבוצה בנתיבים נפרדים על ג'ל. הפצת החלבונים החוצה בדרך זו מאפשרת לראות מה ריכוז הולך וגדל של תרופות עושה לחלבון מסוים.

כתם צפוני

כתמים בצפון משמשים לגילוי RNA. ניתן לשבור תאים לשחרור ה- RNA שלהם. ניתן להפעיל את ה- RNA מסוגי תאים שונים בנתיבים נפרדים על ג'ל. הג'ל מפזר את ה- RNA השונה לפי גודל. שורות מסודרות ומקבילות אלה של RNA מאפשרות לחוקר להשוות לאיזה סוג תא יש כמה RNA. שיטה זו מאפשרת לחוקר לקבוע אם בתאים ממחלה מסוימת יש יותר מ- RNA זה או פחות מאותו RNA. כתמים בצפון עשויים לחשוף כיצד מחלה פועלת ברמה של ייצור RNA.

כתם דרום

הקרישה הדרומית היא טכניקת הכתמים המקורית שהחלה את מערכת השמות. זה הומצא על ידי אדווין דרום. הכתם הדרומי משמש לגילוי כמות ה- DNA בתערובת. בדיוק כמו עם חלבון ו- RNA, DNA של תא יכול להשתחרר כאשר התא הזה נשבר. כתם דרומי מפריד בין DNA בין סוגי תאים שונים לפי גודל. ה- DNA מכל דגימה מתפשט לנתיבים מקבילים ומסודרים. ניתן לאתר חתיכות DNA בודדות באמצעות בדיקה רדיואקטיבית או פלואורסצנטית, אשר נועדה להיקשר רק לאותה פיסת DNA. אות האנרגיה ממבחן רדיואקטיבי, או הבזקי האור מאותת ניאון, מספרים לחוקרים כמה מאותה פיסת DNA נמצאת בכל מדגם.

כתמים אחרים

שלוש טכניקות הכתמים העיקריות - מערבית, צפון ודרום - שונו בדרכים שונות לגילוי מולקולות שונות במקצת. הכתם המערבי לעומת הכתם הדרומי, למשל. מזהה חלבון ו- DNA בהתאמה. כל טכניקה שהשתנתה נעשית בדרך כלל בדרך הרגילה, אך משתמשת בשיטה אחרת כדי לאתר את המולקולה המתפשטת לנתיבים המקבילים. כתמים בדרום-מערב מגלים מולקולות של חלבון הדבוק ב- DNA. כתמים בצפון-מערב מגלים מולקולות של חלבון הדבוקות ב- RNA. כתמים מערביים מזהים מולקולות של חלבון הדבוק בחלבונים אחרים.