תוֹכֶן
חישוב טיטר לנגיף הוא דרך מורכבת לומר שמדען סופר את מספר הנגיפים במדגם מסוים. כדי לחשב את כותרות הנגיף מדענים מדביקים צלחות של חיידקים גדלים בתמיסות ויראליות בריכוזים משתנים ומחשבים את מספר הנגיפים בתמיסה המקורית על ידי ספירת החיידקים שמתו בגלל הזיהום הנגיפי.
דילולים סידוריים
לבש כפפות, מלא 10 צינורות תרבות עם 9 מ"ל מרק ותייג אותם "10 ^ -1," "10 ^ -2", "10 ^ -3," וכן הלאה עד "10 ^ -10." צינורות אלה ישמש לדילולים סדרתיים ויראליים המשמשים לחישוב titer phage. מכיוון שנגיפים יכולים לצמוח לריכוזים גבוהים במיוחד, עליכם לדלל אותם כדי לספור אותם ביעילות. כל צינור מייצג דילול פי עשרה של הנגיף.
קח 1 מ"ל מתרבית הנגיף שאתה רוצה לחשב לטרגום הפאגים והעביר אותו לצינור שכותרתו "10 ^ -1" עם פיפטה. מערבבים היטב את הצינור. זהו הדילול הראשון שלך פי עשרה.
קח 1 מ"ל מהתרבות המעורבת מהצינור שלך שכותרתו "10 ^ -1" והעבר אותו עם פיפטה חדשה לצינור הבא, שכותרתו "10 ^ -2." מערבבים גם את הצינור הזה.
המשך דפוס זה ליצירת סדרת דילול סדרתי. בסופו של דבר תמצאו 9 צינורות של 9 מ"ל ו 1 צינור של 10 מ"ל. העומסים הנגיפיים בצינורות שלך ידוללו בכל מקום מעשר פעמים (הצינור הראשון שלך) או 100 פעמים (הצינור השני שלך) לעשרה מיליארד פעמים (הצינור הסופי שלך).
הכנת צלחות לחישוב טיטר
קח 10 צינורות של אגר רך טריפטון ו 10 צלחות פטרי ותייג אותן כך שתתאים לצינורות הדילול הסדריים שלך.
שחרר את הכובעים כך שלא יתפוצצו בחום ואז הניחו את צינורות האגר שלך בספל מים רותחים. זה ימס את האגר כך שתוכלו לשפוך אותו לצלחות פטרי.
העבר את הצינורות שלך לאמבט מים חמים לפחות 45 מעלות צלזיוס. זה יבטיח כי האגר שלך לא יתמצק בתוך הצינורות לפני שיש לך סיכוי לשפוך אותו לצלחת פטרי.
הוסף שתי טיפות של תרבות חיידקים לאגר שלך וערבב אותה בעדינות. אלה החיידקים שתהרגו, מה שמאפשר לך לספור את מספר חלקיקי הנגיף בתמיסה מסוימת.
הוסף 1 מ"ל מכל דילול סדרתי לצינור האגר המקביל לו, בעוד הצינורות עדיין באמבט המים החמים. לדוגמה, 1 מ"ל מהדליל הסידורי 10 ^ -1 שלך אמור להיכנס לצינור האגר שכותרתו "10 ^ -1."
מערבבים כל צינור ואז שפכו כל צינור לצלחת פטרי עם התווית המתאימה. זה יוצר שכבה דקה של אגר שחוסן חיידקים ווירוסים בכל צלחת. תנו לפלטות לצמוח בין לילה בחממה.
ספירה וחישוב טיטר ווירוסים
הוצא את הצלחות שלך מהחממה ובחן אותן. אתה אמור לראות אזורים מעוננים בכל הצלחת שבהם גדלו חיידקים, למעט כתמים קטנים וברורים הנקראים פלאק. לוחות אלה הם כתמים של חיידקים מתים, וכל לוח מייצג נגיף אחד.
מצא צלחת שיש בה בין 30 ל -300 לוחיות וספור את המספר המדויק של לוחיות על אותה לוחית.
קח את מספר הלוחות שנמצאים בצלחתך והכפיל ב -10. אם ספרת 157 לוחיות היית מקבל 1570.
הכפל את המספר שקיבלת בשלב הקודם על ידי היפוך המספר בצינור הדילול שלך. לדוגמה, אם הצלחת שבחרת הייתה צלחת 10 ^ -5, היית מכפיל 1570 ב- 10 ^ 5 כדי להשיג 157000000. המספר הסופי הזה הוא טיטר הפאגים שלך, ומייצג את מספר הנגיפים לכל מ"ל מהתרבות המקורית שלך.